Para la fijación, es esencial que el material a estudiar sea preservado inmediatamente después del sacrificio del animal, si es posible hay que tomar biopsias o realizar la extirpación de diferentes órganos con el animal bajo anestesia general, pues de esta manera se evita al mí¡ximo la autólisis celular que se inicia inmediatamente después de la muerte, el procedimiento de rutina es en general el siguiente:

1. Se deben preparar los reactivos fijadores o mezclas, inmediatamente antes de su aplicación o se refrigerarí¡n a 4° C hasta su empleo, se tendrí¡ en cuenta que el volumen del fijador sea entre: para biopsias de entre 1 y 2 mm 1:6, muestras para diagnóstico 1:10 y para cerebros completos 1:60, volumen muestra/fijador. La cantidad de fijador depende de la muestra (tamaí±o origen y estudio que se aplicarí¡) y del tipo de fijador empleado (formólico, alcohólico, en base a sales y mezclas), los fijadores solo se utilizan una vez.
2. Se preparan los recipientes, principalmente de vidrio o de plí¡stico con tapa de sello hermético.
3. Se dispondrí¡n etiquetas de papel para sumergidas junto con las muestras en el fijador o etiquetas auto adheribles para el exterior del recipiente.
4. El sacrificio por medios humanitarios, inmediatamente antes de la obtención de las muestras es lo ideal, pero si la muestra se obtiene de un cadí¡ver, es esencial extraerla lo mí¡s pronto posible después de la muerte, para evitar la autólisis, contaminación con bacterias y emplear el fijador o mezcla mí¡s adecuados para evitar encogimiento u otro artefacto producido por la fijación, evitando así­ deformar la imagen microscópica.
5. La pieza obtenida, serí¡ enjuagada cuidadosamente por inmersión en agua destilada, o en su defecto, agua corriente, para quitar el exceso de material extraí±o, posteriormente se sumergirí¡ en el fijador o conservador, evitando que quede pegada a las paredes del frasco, las piezas que floten se pueden sumergir al ser introducidas en una bolsa de gasa con algodón para que floten dentro del fijador. Se deberí¡n evitar burbujas de aire ya que dificulta la acción homogénea del fijador o conservador. Las biopsias no se lavan o enjuagan.
6. Para evitar que los tejidos sufran alguna lesión mecí¡nica, se deberí¡ utilizar material limpio y afilado, la manipulación serí¡ cuidadosa evitando “morder” o “aplastar” las piezas con pinzas o cuchillos.
7. El fraccionamiento del material se deberí¡ realizar sobre una superficie que evite la adherencia de los órganos y tejidos (papel, parafina o caucho de silicón), reduciendo las muestras al tamaí±o adecuado con hojas de bisturí­ o de corte nuevas o bien afiladas. Para material suave y friable se recomienda la fijación por algunos minutos, antes del corte definitivo de las muestras.
8. El corte y seccionamiento definitivo de las muestras se realizarí¡: órganos parenquimatosos, en forma piramidal, iniciando con el vértice en el centro del órgano; órganos tubulares, secciones rectangulares que contengan todas las túnicas de la muestra. La pieza deberí¡ contener un í¡rea representativa del órgano por estudiar, (serosa, cí¡psula, trabéculas, conductos, parénquima y en su caso una porción de la lesión macroscópica, si es posible junto a una porción aparentemente normal.
9. Para la mayorí­a de los fijadores una fijación a temperatura ambiente es adecuada, pero se recomienda la fijación a temperatura menor de cuatro grados Centí­grados, cuando: la muestra provenga de necropsia, la temperatura del medio ambiente sea superior a 15 grados Centí­grados en el í¡rea de trabajo y si se requiere de estudios relacionados con la composición quí­mica de la muestra.
10. Para que las muestras tengan un embebido total se pueden someter a un vací­o suave o en el caso de muestras con pelo, lana, escamas o plumas, en el momento de la obtención lavar con agua adicionada de un agente tensoactivo, asegurando así­ que el fijador esté en contacto con todas las partes de la muestra.
11. Una vez que la muestra fue tomada, seccionada adecuadamente y etiquetada, se terminarí¡ la fijación a cuatro grados Centí­grados.
12. Las muestras que han cumplido con su tiempo de fijación serí¡n lavadas en agua, alcohol al 70 % o alcohol absoluto según sea el caso, para su posterior procesamiento ó conservación y almacenaje.

Dr. Germí¡n Isauro Garrido Farií±a
Presidente SMH